量子点，又称为纳米晶，是一种由II－VI族或III－V族元素组成的纳米颗粒，其粒径介于1～10nm之间。由于电子和空穴被量子限域，连续的能带结构变成具有分子特性的分立能级结构，受激后可发射荧光。它具有以下主要性质：

(l)量子点的发射光谱可通过改变量子点的尺寸和化学组分来控制，波长覆盖整个可见光区；

(2)量子点具有很好的光稳定性，与最常用的有机荧光材料“罗丹明6G”相比，其荧光强度高20倍，稳定性高100倍以上；

(3)量子点具有宽的激发谱和窄的发射谱，可以实现一元激发，多元发射，且多色量子点间不出现光谱交叠；

(4)量子点具有较大的斯托克斯位移，可以避免发射光谱与激发光谱的重叠；

(5)生物相容性好，量子点经过各种化学修饰之后，可以进行特异性标记；

(6)量子点的荧光寿命长。有机荧光染料的荧光寿命一般仅为几纳秒(这与很多生物样本的自发荧光衰减的时间相当），而量子点的荧光寿命可持续数十纳秒（20ns∽50ns)，这使得光激发后，大多数生物自发荧光已经衰变，而量子点荧光仍然存在，此时即可得到无背景干扰的荧光信号。

　　与传统的染料分子相比，量子点具有多种优势，是一种理想的荧光探针。比如可承受多次激发和光发射；持久的稳定性可以让研究人员更长时间地观测细胞和组织；量子点色彩丰富，可观察生物体系的复杂性。量子点特殊的光学性质使得它在生物化学、分子生物学、细胞生物学、基因组学、蛋白质组学、药物筛选、生物大分子相互作用等研究中有极大的应用前景。

　 荧光显微镜下进行观察

　　将直接法与间接法荧光染色的切片至于荧光显微镜下观察，选择激发波长为UV<400nm，发射波长为600nm。

　 注意事项

　　①整个染色过程中组织块要保持湿润，不能干片，否则会导致非特异性染色。

　　②组织切片边缘易干，因此抗体、封闭液、显色液等试剂要充分覆盖组织块，避免干片。

　　1. 阳性细胞判断

　　610nm量子点在荧光显微镜下呈红色。每批染色都要有特异性阳性和阴性对照为基础，才能对染色结果作出判断。抗原表达必须在特定部位，对于临床诊断来说，不在抗原所在部位的阳性着色，一概不能视为阳性。尽量避开出血、坏死及切片刀痕和界面边缘细胞的着色多系内源干扰或人为因素所致，不能视为阳性。

　　2. 抗原表达评价

　　免疫荧光强度和阳性细胞密度是定性定量指标，实际工作中常采用强度和密度结合的方法综合计量，我们常用的免疫荧光组化评分方法如下：

　　定性：细胞免疫荧光强度评分：0（无荧光），1（弱荧光），2（中荧光），3（强荧光）；

　　定量：直接测定量子点的荧光强度。

　　肿瘤细胞阳性率评分：0（0~9%），1（10%~25%），2（26%~50%），3（51%~75%），4（76%~100%）

　　将荧光强度评分和阳性细胞率评分的乘积作为该切片评分值。