线性反应期:只有当底物浓度足够大时,酶促反应速度才会保持恒定。单位时间内吸光度A变化值才与酶活性成正比,仪器才能正常计算出酶活性浓度。
(一)自动分析仪的类型及工作原理
1.连续流动式分析仪:
测定项目相同的各待测样品与试剂混合后的化学反应,是在同一管道中经流动过程完成的。
2.分立式分析仪:
按手工操作的方式编排程序,各个样品和试剂在各自的试管中起反应。
全自动生化分析仪比色杯的材料是不吸收紫外光的石英玻璃。
3.离心式分析仪:
化学反应器装在离心机的转子位置,该圆形反应器称为转头,先将样品和试剂分别置于转头内,当离心机开动后,圆盘内的样品和试剂受离心力的作用而相互混合发生反应,最后流人圆盘外圈的比色槽内,通过比色计进行检测。
基于“同步分析”的原理,在整个分析过程中,各标本与试剂的混合、反应和检测等每一步骤几乎是同时完成的。
4.干片式分析仪:
采用干式试剂片,用反射光度计检测,又称为干化学法。
(二)自动分析仪分析方法
1.平衡法(终点法):
加入标本和试剂后,当反应达到一定阶段时(或终点)测定吸光度值计算待测物质浓度的方法。被测物质在反应过程中应完全被转化或消耗掉,即达到反应的终点。
2.连续监测法(动态法):
可监测整个反应过程,根据所测得的吸光度变化直接计算结果。
3.固定时间法(两点法):
只测定给定时间内的反应变化。
在动力学法检测的生化反应中,由于标本酶含量过高,导致反应体系中酶的底物短时间内消耗殆尽,使得之后的反应吸光度变化近乎为零,反应曲线成为一段较为平坦曲线,其斜率不符合实际情况,所得结果不符合真实值,这种现象称为底物耗尽。
二.如何监测酶活性浓度检测过程中底物耗尽?
1.连续监测法,通过吸光度反应曲线上的线性期(如下图)来计算酶活性或被测物浓度,因此仪器要确定此连续监测期是否呈线性。其监测方法为:
① 监测到的各吸光度值进行线性回归,计算出各点的方差,根据方差值的大小来判断是否呈线性;
② 取连续监测期开始若干点的吸光度变化速率与连续监测期最后若干点的吸光度变化速率进行比较,来判断是否为线性期。
线性反应期:只有当底物浓度足够大时,酶促反应速度才会保持恒定。单位时间内吸光度A变化值才与酶活性成正比,仪器才能正常计算出酶活性浓度。